克氏雙糖鐵瓊脂的原理及使用方法

　　克氏雙糖鐵瓊脂的原理及使用方法

　　一、用途和原理：

　　克氏雙糖鐵瓊脂(Kligler Iron Agar)用于鑒別腸道菌發(fā)酵葡萄糖和乳糖，及產(chǎn)生lhq的生化反應(yīng)。

　　蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時(shí)通過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為lhq，與鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

　　二、使用方法：

　　1、稱取克氏雙糖鐵瓊脂55g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝試管(裝量宜多些)，121℃高壓滅菌15min，制成高層斜面，冷卻后備用。

　　2、挑取待檢菌的新鮮培養(yǎng)物，穿刺接種混合克氏雙糖鐵瓊脂斜面。接種時(shí)先在斜面劃線，然后再穿刺底層。

　　3、將試管放入培養(yǎng)箱內(nèi)36±1℃培養(yǎng)18—24h。

　　4、觀察結(jié)果。觀察斜面與底層的反應(yīng)情況。

　　三、質(zhì)量控制：

　　配成的培養(yǎng)基為紅色，下列菌株接種后于36±1℃培養(yǎng)24h結(jié)果如下：

　　四、常見問題：

　　(1)克氏雙糖鐵試驗(yàn)時(shí)間為什么要控制在18-24h?KIA時(shí)間長了會怎樣,短了會怎樣?

　　答：時(shí)間短了細(xì)菌發(fā)酵不夠充分,現(xiàn)象不明顯。時(shí)間長了細(xì)菌發(fā)酵過度,因?yàn)镵IA是利用酸堿指示劑顯色的，時(shí)間長了自然會引起一些改變而影響判斷，同時(shí)各種副反應(yīng)也會造成很大影響。相對來說,時(shí)間稍微長一點(diǎn)兒影響不大，但不能長得太夸張。

　　(2)MIU試驗(yàn),為什么大腸埃希菌培養(yǎng)24h之后，培養(yǎng)基出現(xiàn)了氣泡?志賀菌的培養(yǎng)基就沒有?

　　答：因?yàn)榇竽c埃希菌是產(chǎn)氣的,而志賀菌不產(chǎn)氣。

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