ELISA試劑盒進行各項實驗條件的選擇

　　ELISA試劑盒進行各項實驗條件的選擇

以下是ELISA試劑盒實驗條件選擇的綜合指南，本生結合關鍵參數與操作規范整理：

一、溫度與孵育條件‌

平衡溫度‌

試劑盒需室溫平衡20-30分鐘(避免冷凝水影響濃度)‌

部分HRP標記抗體需即用即取，無需回溫‌

孵育溫度‌

常規孵育：37℃恒溫(±0.5℃誤差)‌

特殊需求：4℃過夜孵育(低背景信號)‌

二、pH值與緩沖體系‌

洗滌液配制‌

含0.05% Tween-20的PBS緩沖液(pH 7.4)‌

結晶析出時需37℃加熱溶解后稀釋‌

樣本稀釋液‌

推薦pH 7.2-7.6的含蛋白保護劑緩沖液(如1% BSA)‌

三、時間控制‌

關鍵步驟時間‌

抗原抗體反應：60-90分鐘(雙抗體夾心法)‌

顯色反應：15-20分鐘(避光)‌

終止反應‌

終止液加入后需5分鐘內讀數(避免信號衰減)‌

四、樣本處理與稀釋‌

樣本預處理‌

離心去除沉淀(8000-1000×g 5分鐘)‌

高濃度樣本需預稀釋(避免鉤狀效應)‌

稀釋策略‌

血清/血漿推薦50%稀釋‌

組織裂解液需1-2 mg/mL蛋白濃度‌

五、質量控制措施‌

對照設置‌

空白孔(稀釋液)+ 標準品梯度孔(R²>0.98)‌

陽性/陰性對照(驗證試劑特異性)‌

重復與校準‌

每樣本設2-3復孔(批內CV<10%)‌

移液器定期校準(尤其小體積加樣)‌

　　注：不同品牌試劑盒參數可能差異較大，建議以說明書為準‌。

注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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