夾心法ELISA與直接法、間接法有何不同?
夾心法ELISA與直接法、間接法在原理、操作步驟、靈敏度及適用場(chǎng)景上存在顯著差異，具體對(duì)比如下：
一、原理與操作步驟
直接法ELISA
原理：將抗原直接包被在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，通過(guò)底物顯色檢測(cè)信號(hào)。
步驟：包被抗原 → 加入酶標(biāo)一抗 → 洗滌 → 顯色檢測(cè)。
特點(diǎn)：步驟簡(jiǎn)單，無(wú)需二抗，但信號(hào)放大有限。
間接法ELISA
原理：抗原包被后，先加入未標(biāo)記的一抗，再通過(guò)酶標(biāo)二抗放大信號(hào)。
步驟：包被抗原 → 加入一抗 → 加入酶標(biāo)二抗 → 洗滌 → 顯色檢測(cè)。
特點(diǎn)：信號(hào)放大顯著，成本低，但可能因二抗非特異性結(jié)合導(dǎo)致假陽(yáng)性。
夾心法ELISA
原理：使用兩種抗體(捕獲抗體和檢測(cè)抗體)分別結(jié)合抗原的不同表位，形成“夾心”結(jié)構(gòu)。
步驟：包被捕獲抗體 → 加入抗原 → 加入檢測(cè)抗體 → 加入酶標(biāo)二抗 → 顯色檢測(cè)。
特點(diǎn)：高特異性、高靈敏度，適用于復(fù)雜樣本，但需抗原具備多個(gè)表位。
二、性能比較
指標(biāo) 直接法 間接法 夾心法
靈敏度 低(信號(hào)無(wú)放大) 高(二抗放大信號(hào)) 最高(雙抗體夾心)
特異性 高(無(wú)二抗干擾) 較低(二抗可能非特異) 最高(雙抗體識(shí)別)
適用樣本 簡(jiǎn)單樣本 一般樣本 復(fù)雜樣本(無(wú)需純化)
成本 高(需標(biāo)記一抗) 低(通用二抗) 中(需兩種抗體)
三、選擇建議
優(yōu)先選擇直接法：需快速檢測(cè)、對(duì)抗原進(jìn)行初步定性分析時(shí)。
優(yōu)先選擇間接法：需高靈敏度、低成本檢測(cè)時(shí)。
優(yōu)先選擇夾心法：檢測(cè)大分子抗原(如蛋白質(zhì))、需高特異性或處理復(fù)雜樣本時(shí)。
注：夾心法對(duì)抗體配對(duì)要求較高，需選擇識(shí)別不同表位的抗體對(duì)以確保特異性。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。
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